Dozarea proteinelor prin metoda spectrofotometrica

label Laboratoare autorenew 2025-09-29, 16:57
Majoritatea substantelor chimice prezinta proprietatea de a absorbi selectiv energia radianta cu a anumita lungime de unda. Astfel, o solutie ne apare colorata pentru ca ea absoarbe toata lumina incidenta, cu exceptia aceleia pe care o percepe ochiul (o reflecta).



Interpretarea modului de absorbtie al substantelor (UV, VIS, IR) permite evaluarea structurii lor (prin comparare cu spectre etalon) precum si elucidarea echilibrelor care se stabilesc în solutii. În aceasta interpretare se tine cont de legea generala a absorbtiei (legea Lambert-Beer): Coeficientul de extinctie este functie de drumul optic (lungimea stratului de proba strabatut), concentratia si natura substantei care intra în compozitia mediului transparent (proba). E = ??c?l (unde ? este coeficientul de extinctie, c este concentratia probei iar l este drumul optic).

Aparatul folosit pentru determinari cantitative si calitative ale substantelor supuse iradierii cu lumina de diferite lungimi de unda, se numeste spectrofotometru. El este compus din mai multe parti, dupa cum urmeaza:
a) sursa de lumina (în principiu functioneaza la toate lungimile de unda),
b) sistem de fante (care lasa sa treaca doar un fascicul paralel de lumina),
c) monocromator (poate fi o prisma de difractie fixata pe un cadran mobil sau o retea de difractie) – cu rol în separarea fasciculului incident în radiatiile monocromatice componente,
d) cuva pentru proba (facuta din sticla - pentru masuratori în domeniu vizibil (VIS: 400-700 nm) si din cuart - pentru masuratori în domeniul ultraviolet (UV: 200-400 nm); poate avea forma de paralelipiped sau de sticluta si diverse volume – 1, 1,5, 3, 4 mL),
e) receptor de radiatie ? senzor ? detector,
f) amplificator de radiatie,
g) sistem de redare a datelor